| 产品编号 | 名称 | 包装 | 品牌 | 目录价 | 促销价 | 货期 | 数量 | 购物车 |
| SB-EGR225S | T7核酸内切酶 I T7 Endonuclease I | 1250 U | 圣尔生物share-bio | ¥1680.00 |
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| SB-EGR225S | T7核酸内切酶 I T7 Endonuclease I | 250 U | 圣尔生物share-bio | ¥400.00 |
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T7核酸内切酶 I T7 Endonuclease I 介绍
| 产品详情 | 【产品简介】 T7 EndonucleaseI(T7 EndoI,T7 EI)，中文名称T7核酸内切酶I，可识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或DNA分叉点、异源双链DNA，切割位点位于错配位点5'端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。此外T7EI也能以很慢的速度切割含有缺刻的双链DNA。值得注意的是，T7EI可以识别长度大于或等于2个碱基对( bp)的插入、缺失或突变导致的DNA错配，但不能识别1 bp的插入、缺失或突变。同时，T7 EndonucleaseI无法识别所有的DNA错配，对C错配的切割效果最佳。 本品为克隆重组T7 EndonucleaseI基因后在大肠杆菌中表达纯化获得的高纯度蛋白，不含其他内切酶或外切酶污染。 【活性定义】 1活性单位是指在50 μl体系中，37°C反应1h将1μg超螺旋十字形结构pUC(AT)的90 % 以上转换为线性结构所需的酶量。 【反应条件】 37°C反应15~30 min 【失活条件】 85°C加热15 min或加入1.5 μl的0.25 M EDTA终止酶切反应 【应用范围】 1.基因突变、SNP、TALEN或CRISPR/Cas9形成的突变体检测。 2.检测或切割异源双链DNA和切刻的DNA。 3.随机切割线性DNA进行鸟枪法克隆。 【质量控制】 蛋白纯度：经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95 % 。 非特异性内切酶活性：在20 μl反应体系中将10U T7 EndonucleaseI与200 ng的质粒DNA在37°C共同温育2h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20 % 超螺旋质粒DNA转变成缺刻或线性状态。 DNase活性：在20 μl反应体系中将10U T7 EndonucleaseI与15 ng的双链DNA片段在37°C共同温育2h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化。 【使用方法】 1.配制退火反应体系
Control Template为突变型和野生型PCR产物1:1(各100 ng)的混合物，使用前需退火成含不配对的杂合链。退火后经T7 EI酶切产生620 bp和175 bp条带。 2.使用PCR仪退火
3.T7 Endonuclease I酶切
①37°C反应15~30 min； ②85°C加热15 min或加入1.5 μl的0.25 M EDTA终止酶切反应。 4.将酶切产物使用2 %的琼脂糖凝胶进行电泳检测 【注意事项】 1.T7 Endonuclease I具有底物结构选择性，以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时必须控制酶量和反应时间以达到最佳酶切效果。 2.反应温度超过42°C时会使T7 Endonuclease I非特异性核酸酶活性增强，超过55°C会导致酶活下降。 3.Mn2+会显著增加T7 EndonucleaseI非特异性核酸酶活性，请使用不含Mn2+的PCR Buffer进行PCR扩增。 4.T7 Endonuclease I可兼容多种PCR Buffer，PCR产物可不经过纯化直接用于酶切检测，若酶切结果异常，可以将PCR产物纯化后再进行实验。 |
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| 储存条件及期限 | 于-20℃保存 |
T7核酸内切酶 I T7 Endonuclease I 说明书
For research use only. Not intended for human and animal therapeutic or diagnostic use.
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