Taq DNA连接酶 Tag DNA Ligase

Taq DNA连接酶 Tag DNA Ligase

货      号 SB-EGR220S
规      格 1000 U
品      牌 圣尔生物share-bio
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SB-EGR220S Taq DNA连接酶 Tag DNA Ligase 1000 U 圣尔生物share-bio ¥290.00

Taq DNA连接酶 Tag DNA Ligase 介绍

产品详情

产品简介

Taq DNA Ligase是一种耐高温连接酶,它能催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5-磷酸和3-羟基之间形成磷酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶DNA完全配对,且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生。因此,可以用于单碱基替换检测。Taq DNA LigaseNAD+为辅酶因子,在45~65°C范围内均有活性。

活性定义

50 μl反应体系中,45°C条件下温育15 min能使50 % 1μgBstEII消化的λDNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

酶活检测条件

DNA底物(20ug/ml)和1×TaqDNALigase反应缓冲液45°C温育15 min,加入终止染液(50 % 甘油,50mM EDTA和溴酚兰)终止反应,70°C加热10 min后经0.7 % 琼脂糖凝胶电泳,由于连接反应,经BstEII消化的λDNA粘端在70°C温育后仍将保持在一起。

质量控制

核酸内切酶残留测试:在反应体系中加入超螺旋的DNA底物,孵育4h,经琼脂糖凝胶电泳,无肉眼可见的环状切口DNA出现。

核酸外切酶残留检测:将酶液与双链DNA底物在37°C温育16h,通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

宿主检测:将酶液中残留的核酸经E.coli 16S rDNA特异性的TaqMan qPCR检测,E.coli基因组残留低于10拷贝。

使用方法

①于冰上配制如下反应体系:

试剂

使用量

DNA

Up to 1 μg

10× Taq DNA Ligase Buer

5 μl

Taq DNA Ligase

2 μl

ddH2O

Up to 50 μl

 ②充分混匀并瞬离,45°C温育15  min

③加入终止液(50 % 甘油,50 mM EDTA和溴酚兰)终止反应,不可热失活。

储存条件及期限 于-20℃保存
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搜索MSDS
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Taq DNA连接酶 Tag DNA Ligase 说明书

For research use only. Not intended for human and animal therapeutic or diagnostic use.

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