siRNA干扰套餐

功能介绍与实验案例

 

siRNA Real-Time PCR结果分析

对于RNAi实验而言,我们通常需要知道的是某一特定细胞在导入siRNA前后某一特定基因的表达变化情况来判断siRNA起到了Gene Knockdown作用。应用荧光定量PCR的方法,可以通过两种途径来实现上述判断

一是测定特定细胞在导入siRNA前后某一特定基因mRNA数量的变化,即为绝对定量;

二是通过检测特定基因与某一管家基因在在导入siRNA前后相对表达情况的变化,即为相对定量。通常采用相对定量的方法来检测siRNA的Gene Knockdown作用。

1.Real-Time PCR 实验设计

Real-Time PCR实验设计时应包括实验组(导入siRNA),阴性对照(Negative Control)和Mock Transfection三组。每组至少三个重复。各组同时检测目标基因和管家基因的Ct值。下例中以GAPDH为管家基因。

 

2.Real-Time PCR得到siRNA导入前后目标基因和管家基因的Ct值

各组重复实验的Ct值差异不能过大;一般地,重复实验Ct值差异在1以内是可以接受的。

 

实验组

阴性对照(NC)

Mock Transfection

Target Gene

GAPDH

Target Gene

GAPDH

Target Gene

GAPDH

30.40

23.63

24.21

22.66

26.21

24.60

30.35

23.40

24.60

22.56

26.15

24.31

30.41

23.52

24.66

22.48

26.35

24.72

 

3.Real-Time PCR数据分析

Mock Tansfection为对照(Calibrator),管家基因为Normalizer,ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct管家基因)实验组-( Ct目的基因- Ct管家基因)对照

 

 

Target Gene

GAPDH

ΔCt

ΔΔCt

Target Gene

 

Average Ct

Average Ct

Target Gene–GAPDH

ΔCt–ΔCt, Mock

Rel. to Mock

Mock

26.24±0.10

24.54±0.21

1.7±0.21

0.00±0.21

1.0(1.16-0.86)

实验组

30.39±0.09*1

23.51±0.15*2

6.88±0.17*3

5.18±0.17

0.027(0.0240.031)

NC

24.49±0.24

22.56±0.09

1.93±0.25

0.23±0.25

0.85(0.71-1.01)

注:*1 为同一样本重复实验的Ct值的标准偏差,可用Excel 计算得到; 
*2 计算公式为 ,例如 =0.17
*3 计算公式为2△△Ct+S 和2△△CtS,S为△△Ct的标准偏差,例如 2(2.5+0.10) =5.3

 

 

 

客户只需提供基因序列GeneID或者Accession number, 我们免费帮您设计选择合适的位点,siRNA oligo 细胞转染效率达到70%以上;

我们可以保证至少有一对可以有效的抑制相应基因(mRNA)的表达,抑制效率可达70%(下限偏差不超过5%)。



相关产品介绍 

产品名称

EasyTrans DNA transfection

reagent转染试剂

Lipu2000 转染试剂

Lipu3000 DNA/siRNA转染试剂

Transfection More

转染试剂

产品编号

SB-C017

SB-C005

SB-C006

SB-C0010

产品特性

新一代阳离子聚合物转染试剂。

经典脂质体转染试剂

采用了先进的脂质纳米颗粒技术,

实现绝佳转染性能和可重复性的结果。

非脂质体阳离子聚合物

转染试剂

应用范围

DNA转染

DNA和RNA转染

DNA或siRNA转染

DNARNA转染

适用范围

贴壁细胞和悬浮细胞

(哺乳动物细胞系)的转染。

贴壁细胞和悬浮细胞

(哺乳动物细胞系)的转染。

最广泛类型的常见及难转染细胞

贴壁细胞和悬浮细胞

产品规格

1 ml;10 ml;50 ml

1.5 ml

1.5 ml

1.5 ml

产品价格

100;800;3000

1500

2500

800

 

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