核酸外切酶 I Exonuclease I

核酸外切酶 I Exonuclease I

货      号 SB-EGR223S
规      格 1500 U
品      牌 圣尔生物share-bio
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SB-EGR223S 核酸外切酶 I Exonuclease I 1500 U 圣尔生物share-bio ¥210.00
SB-EGR223S 核酸外切酶 I Exonuclease I 7500 U 圣尔生物share-bio ¥860.00

核酸外切酶 I Exonuclease I 介绍

产品详情

产品简介

Exonuclease I(E.coli)是单链特异性核酸外切酶,沿3'-5'方向降解单链DNA,释放5'-脱氧核糖核苷酸。ExoI对单链有很强的特异性,不会降解双链DNARNA。此外,也无法降解由磷酰基团或乙酰基团封闭了3'-OH末端的DNA单链。本产品是把ExoI基因(E.coli)在大肠杆菌中进行重组表达后,经多次纯化分离而得到的。

活性定义

1活性单位(U)是指以单链DNA为底物,37°C1×ExoI缓冲液条件下,30 min内释放10 nmol酸溶性核苷酸所需的酶量。

反应条件

37℃温育 15~30 min

失活条件

80℃温育 20 min

应用范围

1.PCR产物中去除引物和寡核苷酸:ExoI可去除PCR反应中未用完的引物以及扩增产生的多余的单链DNA

2.去除核酸混合物中的ssDNAExoI可特异性地消化反应液中的ssDNA,而不会消化dsDNARNA

3.ssDNA检测:ExoI可用于检测存在游离3'羟基的ssDNA

质量控制

蛋白纯度:经SDS-PAGE凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于95 %

非特异性内切酶活性:37°C下,在20 μl反应体系中将100U Exonuclease I200 ng超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于20 % 的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

DNase活性:37°C下,在20 μl反应体系中将100U Exonuclease I15 ng双链DNA片段共同温育16h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,双链DNA片段无变化。

使用方法

应用1 PCR反应产物中去除引物或其他单链残留

组分

使用量

PCR mixture

5 μl

Exonuclease I

0.5 μl (10 U)

 注:配合虾碱性磷酸酶(SAP)用来去除残存的单核苷酸(dNTPs),之后不需要对PCR产物进行纯化,即可以进行测序反应。

反应条件37℃温育 15~30 min

失活条件80℃温育 20 min

应用2 单链DNA去除

组分

使用量

DNA mixture

2 μg

Exonuclease I

1 μl

10× Exo I Buffer

2 μl

ddH2O

Up to 20 μl

 DNA mixture中的单链DNA不超过1 μg

反应条件37℃温育 15~30 min

失活条件80℃温育 20 min

注意事项

1. Exo I 可兼容绝大多数PCR体系,可直接在PCR产物中添加。纯化后的PCR产物可直接用于测序,但不推荐直接用于克隆。

2. Exo I 用于单独去除ssDNA的实验,推荐搭配10×Exo I Buffer 使用。

3. Exo I 不能切割双链DNA,因此含有二级结构的单链DNA 需要 变性后才能完全消化。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行 实验操作。

储存条件及期限 于-20℃保存
搜索质检报告(COA)
搜索MSDS
暂无技术资料

核酸外切酶 I Exonuclease I 说明书

For research use only. Not intended for human and animal therapeutic or diagnostic use.

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