Quazol™ 总RNA提取试剂盒 Quazol™ RNA extraction reagent

 【产品简介】

 Quazol™总RNA提取试剂可用于从人、动物、植物、酵母菌或细菌的细胞和组织样本中分离总RNA，可分离RNA长达15 kb，或siRNA、microRNA等小RNA。本试剂高效抑制核糖核酸酶活性，从而在裂解样本后维持了RNA的完整性。通过Quazol™分离得到的总RNA纯度高，不含蛋白和DNA污染，可直接用于逆转录、一步法qRT-PCR、体外翻译、Northern、点杂交、RNase protection assay，也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

 【产品详情】

 每1 mL Quazol™可以抽提约5×106个细胞或50-80 mg的组织样品；也可以用于抽提大于1 g的组织和大于107个细胞。每百万细胞可得5-15 μg总RNA；每毫克组织可得1-10 μg总RNA。

 【使用方法】

 1 细胞裂解或组织匀浆

 a 贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米细胞加入1 ml Quazol™，例如，六孔板每孔加1 mL Quazol™，12孔板每孔加0.5 mL Quazol™。水平晃动3-5次，再用枪吹打2-3次，确保全部裂解，然后吸至离心管中。

 b 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5×106至1×107动植物或酵母细胞，或107细菌，加入1 mL Quazol™ 。用枪吹打或适当涡旋，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。

 c 组织：先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内。每50-80 mg组织加入1 ml Quazol™，匀浆。对于RNA完整性要求比较高的情况，推荐先液氮冷冻组织块，然后在低温下用研钵研碎组织，随后再加入Quazol™进行总RNA抽提。

 2 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，Quazol™裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000×g 4°C离心10分钟，然后吸取澄清的Quazol™裂解产物至一新的离心管中。

 3 室温放置5分钟，使样品充分裂解。

 4 每毫升Quazol™加入0.2 mL氯仿，涡旋混匀或猛烈晃动15秒，室温放置2-3分钟。

 5 12,000×g 4°C离心15分钟，然后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升Quazol™约可吸取0.5-0.55 mL。

 6 按每毫升最初的Quazol™加入0.5mL异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。如果希望提取microRNA等小RNA，推荐-70°C沉淀过夜。

 7 离心12,000×g 4°C 10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。

 8 每毫升最初的Quazol™加入1 mL 75%乙醇(DEPC水配制)，涡旋或颠倒混匀。

 9 离心7,500×g 4°C 5分钟，弃上清后短暂离心，小心吸尽液体。

 10 待RNA略干后，加入20 μL DEPC水溶解，-70°C冻存。注意：切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解。

 【注意事项】

 1 需自备氯仿，异丙醇，75%乙醇（DEPC水或无酶水），DEPC水或无酶水。

 2 所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150°C烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01% DEPC至重蒸水或超纯水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。

 3 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量Quazol™，并裂解样品后冻存。

 4 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。

 5 本品含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请及时就医。

 6 Quazol™可连续沉淀单份样本中的RNA、DNA和蛋白。使用Quazol™ 试剂均质化样本后，加入氯仿，使匀浆分离成透明的上层水层（含RNA）、中间相和下层有机层（含DNA和蛋白）。使用异丙醇从水层中沉淀出RNA。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。（DNA和蛋白提取为建议步骤，未经验证。）

 【技术资料】

 1 需自备氯仿，异丙醇，75%乙醇（DEPC水或无酶水），DEPC水或无酶水。

 2 所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150°C烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01% DEPC至重蒸水或超纯水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。

 3 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量Quazol™，并裂解样品后冻存。

 4 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。

 5 本品含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请及时就医。

 6 Quazol™可连续沉淀单份样本中的RNA、DNA和蛋白。使用Quazol™ 试剂均质化样本后，加入氯仿，使匀浆分离成透明的上层水层（含RNA）、中间相和下层有机层（含DNA和蛋白）。使用异丙醇从水层中沉淀出RNA。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。（DNA和蛋白提取为建议步骤，未经验证。）

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