2025/5/22 10:57:00

我们提供全面的RNA提取解决方案,从传统方法到最新试剂盒,满足各种样本类型和下游应用需求,确保您获得高质量RNA用于后续研究。

——常见RNA提取方法——

Trizol/酚氯仿法(有机溶剂抽提法)

原理:利用Trizol(苯酚和异硫氰酸胍)裂解细胞,加入氯仿分层后,RNA位于水相,通过异丙醇沉淀获得。

常见试剂:Trizol Reagent , Quazol™总RNA抽提试剂盒 SB-MR009

优点:得率高,可提取小RNA(如miRNA)

缺点:使用有毒有机溶剂,操作较繁琐

硅胶膜离心柱法(柱式法)

原理:高盐低pH条件下RNA吸附于硅胶膜,洗涤后低盐缓冲液洗脱。

常见试剂盒:细胞RNA快速提取试剂盒 SB-R001 组织RNA快速提取试剂盒 SB-R008

优点:操作简便,无有机溶剂

缺点:可能丢失小RNA(<200 nt)

磁珠法(磁珠吸附法)

原理:磁珠表面包被二氧化硅或羧基基团,高盐条件下结合RNA,磁场分离后洗脱。

常见试剂盒:Oligo(dT)22磁珠 SB-YX001

优点:适合自动化,高通量

缺点:成本较高,可能残留磁珠

——RNA提取方法及产品适用样本对比——

方法 原理 优点 缺点 适用样本 产品编号
Quazol法(Trizol法) 酚氯仿分层,异丙醇沉淀

适用范围广,可同时提取RNA/DNA/蛋白质

得率高,可提小RNA

稳定性好

成本低

有毒溶剂

操作复杂

耗时久

容易有盐和酚污染

细胞、动植物组织、细菌 SB-MR009
除以上优点外,无需氯仿(使用氯仿替代物) 细胞、动植物组织、细菌 SB-MR010
柱式法 高盐吸附,低盐洗脱

操作简便

无有机溶剂(有毒试剂)

纯度高

时间短(10min)

可能丢失小RNA

某些特殊样本效果不佳

动物、植物、真菌、血细胞

(不适用于全血及坚硬组织)

SB-R001 
多糖多酚植物 SB-R010
组织、细胞  SB-R008
石蜡包埋组织 SB-NG311
磁珠法 磁珠吸附,磁场分离

适合自动化

高通量

重复性好

成本高

可能残留磁珠

临床样本、高通量 SB-YX001

——RNA提取的下一步应用方向——

 

Northern印迹分析

研究特定RNA分子的表达水平和大小,需要完整的RNA,特别是28S和18S rRNA比例正常。

 

实时定量PCR

精确测量基因表达水平,对RNA完整度要求较高,尤其是长片段转录本的分析。

 

cDNA文库构建

用于转录组研究或基因克隆,需要高质量RNA以避免偏向性。

 

RNA测序

新一代测序技术对RNA质量要求极高,降解的RNA会导致数据偏向3'端。

 

微阵列分析

需要足够量的完整RNA以获得可靠的杂交信号。

 

体外翻译系统

研究蛋白质合成机制,需要完整的mRNA。

——RNA提取操作关键注意事项——

 

专用工作区

设置RNA专用操作区,器具专用并定期除菌,在超净台中操作避免RNA酶污染。

 

个人防护

戴一次性橡胶手套并经常更换,避免说话聊天,可戴口罩防止唾液RNA酶污染。

 

器具管理

使用预灭菌无RNA酶耗材,避免共用器具,旧塑料制品需特殊处理去除RNA酶。

 

温度控制

全程冰上操作,低温离心。样品如不立即处理应液氮速冻保存于-80°C。

 

试剂管理

使用未开封新瓶配制溶液,确保足够Trizol用量,按比例调整小量样品体积。

 

关键操作

加氯仿后充分混匀,吸取上清宁少勿多,避免中间层污染,乙醇洗涤两次缩短操作时间。

——产品测评——

植物样本

  水稻-Os 葡萄-Vv 烟草-Nb 玉米-Zm 酵母-Sc
Quazol™总RNA提取试剂
(圣尔#SB-MR009/SB-MR010)
2632.06 ng/mL
A260/280=1.9
73.658 ng/mL
A260/280=1.83
2061 ng/mL
A260/280=1.96
2716.71 ng/mL
A260/280=2.05
5567.87 ng/mL
A260/280=1.91
组织、细胞RNA快速提取试剂盒
(圣尔#SB-R001)
1350.12 ng/mL
A260/280=2.18
297.623 ng/mL
A260/280=1.99
2133.04 ng/mL
A260/280=2.01
2246.63 ng/mL
A260/280=2.04
1626.96 ng/mL
A260/280=2.02
国外T公司总RNA提取试剂 2535.87 ng/mL
A260/280=2.08
90.101 ng/mL
A260/280=1.45
1590.83 ng/mL
A260/280=2.12
2938.29 ng/mL
A260/280=2.06
5383.55 ng/mL
A260/280=1.71
国外In公司总RNA提取试剂 2639.56 ng/mL
A260/280=1.97
191.667 ng/mL
A260/280=1.97
1810.11 ng/mL
A260/280=1.97
2596.24 ng/mL
A260/280=1.97
5295.39 ng/mL
A260/280=1.97

人前列腺癌细胞(22RV1)

  22RV1(人前列腺癌细胞)-重复1 22RV1(人前列腺癌细胞)-重复2
Quazol™总RNA提取试剂
(圣尔#SB-MR009/SB-MR010)
759.396 ng/mL
A260/280=1.97
749.457 ng/mL
A260/280=1.97
国外T公司总RNA提取试剂 715.927 ng/mL
A260/280=1.96
682.115 ng/mL
A260/280=1.94
国外In公司总RNA提取试剂 798.732 ng/mL
A260/280=1.91
826.54 ng/mL
A260/280=1.9
注:所有样本起始量均为100 mg,抽提产物溶于50 μL无酶水,用nanodrop测RNA浓度,并电泳检测RNA完整度。。

 

理想指标:A260/A280比值1.8-2.0表明蛋白质污染少。

RNA电泳结果示例:清晰的28S和18S条带。

选用植物组织样本及动物细胞在相同条件下进行的RNA提取,经浓度检测及A260/A280检测,结果表明,圣尔三款产品与进口产品相比,提取RNA的效果相当(R001为柱式法,产量低于有机溶剂抽提法),且均适用于植物组织与动物细胞RNA提取。

——RNA质量评估标准表——

评估方法 理想结果 可接受范围 不达标可能原因
A260/A280比值 1.9-2.0 1.8-2.0 蛋白质污染(低)、酚残留(高)
A260/A230比值 >2.0 >1.8 酚、盐或其他有机物污染
28S/18S比值 ~2:1 ≥1.5:1 RNA降解
RIN值 ≥9 ≥7 RNA降解或提取过程损伤
电泳图谱 清晰条带,无拖尾 可见28S和18S条带 降解或污染

——常见问题解答——

1. 为什么有时得不到RNA沉淀?
可能原因:
1) 匀浆不完全导致DNA分子大、溶液黏稠,蛋白和DNA复合物包裹RNA;
2) RNA过分稀释不能沉淀。

解决方案:
确保充分匀浆;小量样品按比例减少抽提溶液体积。

2. RNA提取率低可能是什么原因?
可能原因:
1) 系统超负荷导致匀浆不完全;
2) RNA不完全溶解;
3) 样品未及时处理或细胞生长过度激活RNA酶。
解决方案:
控制样品量;确保RNA完全溶解;样品立即处理或液氮冷冻。

3. A260/A280比值低于1.65说明什么?
可能原因:
1) 用水而非TE稀释;
2) Trizol或Quazol量太少;
3) 未室温放置5分钟;
4) 污染苯酚层;
5) RNA未完全溶解。
解决方案:
用TE稀释;确保足够Trizol或Quazol;按步骤操作;避免酚污染;充分溶解RNA。

4. 如何防止RNA降解?
关键措施:
1) 快速处理样品或立即冰冻保存;
2) 样品存于-70℃;
3) 使用无RNA酶器具;
4) RNA溶于TE中而非水;
5) 操作全程保持低温;
6) 使用RNA酶抑制剂。

5. 如何判断RNA电泳结果是否合格?
合格RNA电泳应显示清晰的28S和18S条带,28S亮度约为18S的2倍。条带模糊或比例异常表明RNA降解。
示例描述:"橄榄叶片提取的总RNA,经电泳检测,28S和18S两条带型清晰且28S rRNA的亮度大约是18S rRNA亮度的2倍,这说明分离得到的橄榄叶总RNA比较完整。

 

相关产品

产品编号 产品名称 规格(ml) 目录价(元)
SB-MR090 RNA操作防污染喷剂 RNase Inactivation Reagent 500 ml
SB-MR009 Quazol™ 总RNA提取试剂盒 Quazol™ RNA extraction reagent 10ml
100ml
200ml
1000ml
SB-MR083 RNA细胞、组织保存液 RNA Stabilization Reagent for tissues cells 100 ml
SB-GR015 DEPC水 Diethylpyrocarbonate-treated Water;DEPC-treated Water 100ml
500ml
SB-EGR002S 重组表达的鼠源RNase抑制剂 RNase Inhibitor, Murine 10000 U
SB-R001 细胞RNA快速提取试剂盒(快速无毒) Rapid RNA Isolation Kit for Cells 100次
5次
500次
50次
1000次
SB-MR203 PCR DNA/RNA 污染清除剂 PCR DNA/RNA Degradation Solutions 400ml
SB-G3014 核酸抽提辅助剂(氯仿替代物) Nucleic acid extraction adjuvant;Chloroform substitute 25ml
100ml
10*100ml
SB-DW001 无DNA/RNA酶去离子水 无酶水 DNase/RNase-Free Deionized Water 10*1ml
100*1ml
SB-YX001 Oligo(dT)22磁珠 Oligo(dT)22 Magnetic Beads 2ml
5ml
SB-NG311 石蜡包埋组织RNA快速提取试剂盒 Paraffin-embedded Tissue RNA Purification Kit 100次
50次
SB-R008 组织RNA快速提取试剂盒 Rapid RNA Extraction Kit for Tissue 100T
8T
SB-R010 多糖多酚植物RNA抽提试剂盒 1000Tests
100Tests
500Tests
6Tests
SB-MR010 Quazol™总RNA抽提试剂盒(无需氯仿) 100T
最优采购方案
   © 2005-2025 上海圣尔生物科技有限公司 版权所有,保留所有权利。 沪ICP备15051362号   

全力打造生命科学领域试剂与耗材的国产精品超市