Quazol™总RNA抽提试剂盒(无需氯仿)

【产品组成】

【产品简介】

Quazol™总RNA提取试剂盒，包括总RNA提取试剂和氯仿替代物，无需自备氯仿。本试剂盒可用于从人、动物、植物、酵母菌或细菌的细胞和组织样本中分离总RNA，可分离RNA长达15 kb，或siRNA、microRNA等小RNA。Quazol™高效抑制核糖核酸酶活性，从而在裂解样本后维持了RNA的完整性。核酸抽提辅助剂（氯仿替代物）有效成分为1-溴-3-氯丙烷(1-bromo-3-chloropropane)，毒性远低于氯仿，且具有更强的疏水性，在用试剂法进行RNA或DNA抽提时可完美替代氯仿，对抽提产物质量和得率均无影响。通过Quazol™总RNA提取试剂盒分离得到的总RNA纯度高，不含蛋白和DNA污染，可直接用于逆转录、一步法qRT-PCR、体外翻译、Northern、点杂交、RNase protection assay，也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

【产品详情】

每1 mL Quazol™可以抽提约5×10⁶个细胞或50-80 mg的组织样品；也可以用于抽提大于1 g的组织和大于10⁷个细胞。每百万细胞可得5-15 μg总RNA；每毫克组织可得1-10 μg总RNA。Quazol™与核酸抽提辅助剂按体积比1：0.2使用，可形成分界清晰的中间层。

【使用方法】

1 细胞裂解或组织匀浆

a 贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米细胞加入1 mL Quazol™，例如，六孔板每孔加1 mL Quazol™，12孔板每孔加0.5 mL Quazol™。水平晃动3-5次，再用枪吹打2-3次，确保全部裂解，然后吸至离心管中。

b 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5×10⁶至1×10⁷动植物或酵母细胞，或10⁷细菌，加入1 mL Quazol™。用枪吹打或适当涡旋，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。

c 组织：先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内。每50-80 mg组织加入1 mL Quazol™，匀浆。对于RNA完整性要求比较高的情况，推荐先液氮冷冻组织块，然后在低温下用研钵研碎组织，随后再加入Quazol™进行总RNA抽提。

2 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，Quazol™裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000×g 4°C离心10分钟，然后吸取澄清的Quazol™裂解产物至一新的离心管中。

3 室温放置5分钟，使样品充分裂解。

4 每毫升Quazol™加入0.2 mL核酸抽提辅助剂，涡旋混匀或猛烈晃动15秒，室温放置2-3分钟。

5 12,000×g 4°C离心15分钟，然后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升Quazol™约可吸取0.5-0.55 mL。

6 按每毫升最初的Quazol™加入0.5mL异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。如果希望提取microRNA等小RNA，推荐-70°C沉淀过夜。

7 离心12,000×g 4°C 10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。

8 每毫升最初的Quazol™加入1 mL 75%乙醇(DEPC水配制)，涡旋或颠倒混匀。

9 离心7,500×g 4°C 5分钟，弃上清后短暂离心，小心吸尽液体。

10 待RNA略干后，加入20 μL DEPC水溶解，-70°C冻存。注意：切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解。

【注意事项】

1 需自备异丙醇，75%乙醇（DEPC水或无酶水），DEPC水或无酶水；无需自备氯仿。

2 所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150°C烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01% DEPC至重蒸水或超纯水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。

3 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量Quazol™，并裂解样品后冻存。

4 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。

5 本品含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请及时就医。

6 Quazol™可连续沉淀单份样本中的RNA、DNA和蛋白。使用Quazol™ 试剂均质化样本后，加入氯仿，使匀浆分离成透明的上层水层（含RNA）、中间相和下层有机层（含DNA和蛋白）。使用异丙醇从水层中沉淀出RNA。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。（DNA和蛋白提取为建议步骤，未经验证。）

【技术资料】

1 需自备氯仿，异丙醇，75%乙醇（DEPC水或无酶水），DEPC水或无酶水。

2 所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150°C烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01% DEPC至重蒸水或超纯水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。

3 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量Quazol™，并裂解样品后冻存。

4 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。

5 本品含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请及时就医。

6 Quazol™可连续沉淀单份样本中的RNA、DNA和蛋白。使用Quazol™ 试剂均质化样本后，加入氯仿，使匀浆分离成透明的上层水层（含RNA）、中间相和下层有机层（含DNA和蛋白）。使用异丙醇从水层中沉淀出RNA。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。（DNA和蛋白提取为建议步骤，未经验证。）