组织RNA快速提取试剂盒 Rapid RNA Extraction Kit for Tissue

【产品简介】

本试剂盒可以从少量的生物样品中快速提取高质量的总RNA。具有操作简单、快速、稳定性高的优势。适用于细胞和组织的RNA提取，提取得到的总RNA可用于RT-PCR、qPCR、Northern blotting、cDNA文库构建等多种分子生物学实验。本试剂盒由裂解液（Lysis Buffer）、分层液、清洗液（Wash Buffer）、洗脱液（Elution Buffer）组成，其中Lysis Buffer中含有强变性剂和RNA酶抑制剂，能够迅速裂解样品并失活RNA酶，确保操作过程中RNA的完整性。操作过程简述：裂解样品并按比例加入分层液、取上清加入乙醇混匀上柱、离心分离RNA、清洗、洗脱，整个提取过程仅需15分钟。

【产品详情】

用于细胞样品时：建议用6孔板或3.5 cm培养皿培养细胞，培养至合适的密度进行RNA提取（24孔板培养的细胞培养至90%以上的细胞密度也可使用）。不建议10 cm培养皿培养的细胞直接进行RNA提取，否则可能导致细胞裂解不充分或因核酸过量导致离心柱堵塞或导致基因组残留。

用于组织样品时：组织样品裂解前须称重（在4°C或冰上完成），一般不超过50 mg；对于肝脏、肠等RNA丰度高的组织应。

本试剂盒可提取5×10⁴-3×10⁶个细胞或＜50 mg组织。对于T细胞/B细胞等体积很小或者RNA含量很低的细胞，建议增加细胞数到至少1×10⁶以上。本试剂盒最多可提取到约40 μg左右的总RNA

【使用方法】

1.样品裂解

1.1 贴壁细胞（细胞数≤3×10⁶/孔）：吸干孔板中的培养基，用适量的PBS洗1次；加入500 μL的lysis buffer，枪头吹吸或搅拌数次，直至细胞完全裂解。转移至EP管中，涡旋10秒以充分裂解细胞。

1.2 贴壁细胞（细胞数>3×10⁶/孔）或悬浮细胞：贴壁细胞用胰酶消化至细胞悬浮，取1×10⁶-3×10⁶个细胞至1.5 mL离心管，500×g离心3分钟收集细胞；或者悬浮细胞，取1×10⁶-3×10⁶个细胞至1.5 mL离心管，500×g离心3分钟收集细胞。去上清，离心管中留约10-20 μL液体，轻弹离心管重悬细胞沉淀。加入500 μL lysis buffer，枪头吹吸10次，涡旋10秒钟充分裂解细胞。

1.3 对动物组织（适用于内脏、肿瘤组织等，不适用于皮肤等坚韧的组织）

切取1 mg-50 mg的组织小块至1.5 mL离心管，加入500 μL lysis buffer，用组织匀浆机、手持匀浆仪或研磨棒磨碎组织。【重要】组织必须充分匀浆，直至无肉眼可见的组织块。13000 rpm离心1-2分钟，转移300-400 μL上清至新的1.5 mL离心管中。切勿吸取管底沉淀和泡沫，以免后续操作堵塞离心柱。

1.4 对植物组织（适用于拟南芥、烟草、水稻、玉米等植物叶片及根部组织）

在液氮中，使用研磨器或者研钵研磨成细粉状后，取大约100 mg，加入500 μL Lysis buffer（趁冷加入，避免样品解冻），快速涡旋混匀。13000×g离心1-2分钟，转移上清至新的1.5 mL离心管中。切勿扰动或吸取管底沉淀部分，以免后续操作堵塞离心柱。

2 分层和上柱

2.1 在裂解好的样品中加入50 μL分层液，用手动剧烈摇晃混匀10-15秒，室温静置2分钟后4°C离心，13,000 rpm 3分钟；小心吸取无色上清约200 μL至新的1.5 mL离心管中，切勿吸取白色中间层和红色下层，否则将影响RNA提取纯度。

2.2 向上步上清液中加入等体积无水乙醇，立即充分混匀，转移上清至离心柱上，并尽快离心。

提取mRNA和lncRNA时，需加入等体积的无水乙醇；提取miRNA等小RNA时，需要加入1.6倍体积的无水乙醇。

2.3 5000×g（即约7000 rpm）或12,000×g离心1分钟，弃上清。如果离心柱上仍有明显液体残留可增加离心转速或延长离心时间。

3 柱清洗

3.1 向RNA柱中加入500 μL的wash buffer，12,000×g离心1.5分钟（离心结束后取出柱子时注意不要让收集管内的废液接触到RNA柱，以免污染。倒掉收集管废液，将RNA柱装回收集管，空管离心一次，尽量去除残留的wash buffer）。

3.2 将柱子放到干净的无RNA酶的1.5 mL离心管上，开盖晾干2分钟，使得残留的乙醇挥发。

4 RNA洗脱

4.1 在RNA柱的膜中心部位加入20-50 μL的elution buffer，室温静置2分钟。

4.2 常温离心12 ,000×g 1分钟，洗脱产物立即置于冰上短时间保存、或-80°C长期保存。

【注意事项】

1 建议将Elution buffer、溶解好的引物等分别用RNase free小管分装保存。

2 标签标注的常温试剂均须室温保存。Lysis buffer需冷藏保存，应提前取出，温度恢复至室温之后方可使用。整个RNA提取的操作过程必须在室温进行，不可置于冰上，以避免其间产生不溶物堵塞离心柱。