改良Lillie-Mayer苏木素染色液

苏木素（Hematoxylin）和伊红（Eosin）联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法，苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色；细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。 改良Lillie-Mayer苏木素染色液无毒，无氧化膜，细胞核染色质着色深而细微，临床上常替代Harris苏木素染色液；对细胞核染色很清晰，不着染胞质和纤维成分，属进行性染色，故染色后可以不用盐酸乙醇分化，染色时间约5～8min，如果是充分氧化后可染色3～5min。该试剂常用于糖原等特染、酶组化和免疫组化等染色后复染细胞核作对照染色，尤其适用于经过特殊染色后不能经酸处理时对细胞核的复染，在特殊染色中常与天青石蓝B液联合染色，使细胞核染色后不被后续的酸性染料所褪色。 染色原理： 1、细胞核染色原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 2、细胞质染色原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞质着色，细胞质的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞质的染色与染料液的pH值密切相关，当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点（4.7～5.0）以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞质带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞质着色，呈现红色。 3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用0.5%－1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而褪色，大多数组织经苏木素染色后，必须用盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞质吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞质染色的分明。 4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用，另外用自来水（尤其是温水）浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

自备试剂

1、盐酸乙醇分化液、系列乙醇、伊红染色液（醇溶）、4%多聚甲醛 2、蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等 3、显微镜

使用方法

（一）石蜡切片染色 1、切片脱蜡至水 ①二甲苯或浸蜡脱蜡透明液作用2次，每次5～10min。 （（可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。 ③95%乙醇 3～5min ④90%乙醇 3～5min ⑤80%乙醇 3～5min ⑥自来水或蒸馏水（亦可用30~40℃温水）冲洗 1～3min 2、染色 ①改良Lillie-Mayer苏木素染色液 3～8min ②自来水或蒸馏水冲洗 5～10s （（可选）盐酸乙醇分解 2～5s ④自来水冲洗 20～30s ⑤蓝化液或温水返蓝 20～40s ⑥80%乙醇脱水 30～60s ⑦伊红染色液（醇溶）染色 20s～3min 3、脱水、透明、封固 ①80%乙醇 10～20s ②90%乙醇 10～20s ③95%乙醇作用2次，每次1～2min。 ④无水乙醇作用2次，每次2～3min。 ⑤二甲苯或浸蜡脱蜡透明液透明3次，每次2～3min。 ⑥中性树胶封片。 （二）冰冻切片染色 1、乙醚－乙醇混合固定液 5～10s 2、自来水冲洗 2～5s 3、苏木素染色液滴染1～2min（可加热至50℃） 4、自来水冲洗 2～5s 5、（可选）盐酸乙醇分解 2～5s 6、自来水冲洗 2～5s 7、蓝化液或温水返蓝 2～5s 8、80%乙醇脱水 5～10s 9、伊红染色液（醇溶）染色 2～5s 10、80%乙醇 1～2s 11、95%乙醇 1～2s 12、无水乙醇 2～5s 13、苯酚二甲苯（1:3） 2～5s 14、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液透明3次，每次2～5s。 15、中性树胶封片。 （三）细胞染色 1、4%多聚甲醛固定10～20min。 2、自来水冲洗2次，每次2min。 3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。 4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。

技术资料

细胞核呈蓝色； 细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色； 角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

注意事项

1、切片脱蜡应尽量干净。 2、系列乙醇应经常更换新液。 3、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。 4、乙醚－乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。 5、冷冻切片染色时间尽量要短。 6、蓝化液常使用0.2%～1%氨水或Scott促蓝液或0.1%～1%碳酸锂溶液。