
NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer
货 号 | SB-PR421 | ||
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英 文 名 | NP-40 Lysis Buffer | ||
规 格 | 100mL | ||
品 牌 | 圣尔生物share-bio | ||
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产品编号 | 名称 | 包装 | 品牌 | 目录价 | 促销价 | 货期 | 数量 | 购物车 |
SB-PR421 | NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer | 100mL | 圣尔生物share-bio | ¥140.00 |
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SB-PR421 | NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer | 500mL | 圣尔生物share-bio | ¥430.00 |
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NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer 介绍
产品详情 | 【产品简介】 NP-40裂解液(NP-40裂解液)是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。 【产品详情】 NP-40裂解液主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40以及sodium pyropho-sphate,β-glycerophosphate,sodium fluoride,EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。用NP-40裂解液得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒和Bradford蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。 【使用方法】 1 贴壁细胞 1.1 取NP-40裂解液置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1 mM,或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 1.2 去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。 1.3 按照6孔板每孔加入100-200 μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40裂解液。移液器轻轻吹打,使裂解和细胞充分接触。置于冰上或4°C裂解15-30分钟,通常裂解液作用于细胞1-3秒内,细胞就会被裂解。 1.4 10000-12000×g,4°C离心5-10分钟(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 1.5 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 2 悬浮培养细胞 2.1 取NP-40裂解液置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1 mM,或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 2.2 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。 2.3 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40裂解液。通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200-250 μl,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 2.4 10000-12000×g,4°C离心5-10分钟(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 2.5 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 3 组织样本 3.1 取NP-40裂解液置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1 mM,或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 3.2 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。 3.3 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30分钟以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1-2分钟之内,以减少蛋白的降解。 3.4 按照每20 mg组织加入150-250 μl裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液。冰上或4°C裂解30-60分钟。 3.5 步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20 mg组织加入150-250 μl裂解液的比例,加入含有PMSF的NP-40裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制在1-2分钟之内,心减少蛋白的降解。 3.6 10000-12000×g,4°C离心5-15分钟(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 3.7 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 【注意事项】 1 在贴壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。 2 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。 3 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。 4 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切片直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 5 裂解液裂解细胞时,应用于Western和IP时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。 6 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4°C进行。 7 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA法测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 |
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储存条件及期限 | 开封后于-20℃保存,一年有效,常温运输 |
NP-40裂解液 NP-40 Lysis Buffer 说明书
For research use only. Not intended for human and animal therapeutic or diagnostic use.
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