链霉亲和素磁珠（1 μm）Streptavidin Magnetic Beads

【产品概述】

链霉亲和素磁珠（1 μm）由超顺磁性微球与高纯度链霉亲和素共价结合而成。对生物素系统具有极高的结合亲和力。能够快速、高效、灵敏、特异性地与生物素标记的分子结合及磁性分离。应用包括单链DNA模板制备、RNA和DNA结合蛋白分离、大分子DNA片段固定、产物纯化测序，以及核酸特异性捕获，可针对自动化流程轻松灵活调整。

【微珠属性】

适用范围  IP、co-IP、纯化

磁珠浓度  10 mg/mL

磁珠直径  1 μm

适用抗体种属  分离生物素化蛋白、DNA及PCR产物

蛋白载量  游离生物素 2500 pmol/mg 磁珠；生物素化单链寡核苷酸(24nt) 500 pmol/mg磁珠

生物素化 IgG 20 μg/mg 磁珠

耐受高温  不耐高温

磁珠储液  1×PBS，含 0.1%（v/v）；Tween -20，0.1%（w/v）；叠氮化钠

配基  链霉亲和素

每反应推荐用量  25-50 μL

【试剂准备】

注意：使用前在Lysis buffer、Wash buffer或IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer（圣尔#SB-IP011）中添加适量的蛋白酶抑制剂。

【使用说明】

1 结合生物素化核酸

1.1. 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上20 s，振荡重悬磁珠。用移液器移取100 μL磁珠到新的离心管中。将离心管置于磁性分离器上，静置1 min，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下离心管。

备注：用户可根据生物素化分子的多少，参考产品信息表中磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量。建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1-2倍，使磁珠饱和。

1.2. 加入1 mL Buffer I到离心管中，盖上离心管盖，充分振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。 备注：当步骤 2.1 取用磁珠体积大于1 mL时，加入与磁珠体积相同的Buffer I。

1.3. 重复“步骤 2.2”一次。

1.4. 加入500 μL 的用Buffer I 稀释的生物素化核酸（使磁珠浓度为2 mg/mL），充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合30 min。

1.5. 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。

1.6. 按“步骤1.2”的方法洗涤磁珠三次。

1.7. 根据后续实验的要求，加入合适的低盐缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化核酸步骤完成。磁珠可用于后续操作。

1.8. 用户可以通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量：（反应前浓度 - 反应后浓度）×反应溶液体积。

2 结合生物素化抗体/蛋白操作流程

2.1 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上20 s，振荡重悬磁珠。用移液器移取100 μL磁珠到新的离心管中。磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下离心管。

备注：用户可根据生物素化分子的多少，参考产品信息表中磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量。建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1-2倍，使磁珠饱和。

2.2 加入1 mL Buffer II到离心管中，盖上离心管盖，充分振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。

备注：当步骤2.1取用磁珠体积大于1 mL时，加入与磁珠体积相同的Buffer II。

2.3 重复“步骤2.2”两次，共洗涤三次。

2.4 加入1 mL 用 Buffer II稀释的生物素化抗体/蛋白（使磁珠浓度为1 mg/mL），充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合60 min。

2.5 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。

2.6 按“步骤2.2”的方法洗涤磁珠五次。

2.7 根据后续实验的要求，加入 Buffer II 或其他合适的缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操作。

【注意事项】

1 严禁冻结。

2 密闭保存，避免干燥，保持微珠浸于储液。

3 本品为悬液，使用前需充分混匀，微珠彻底悬浮后吸取，使用过程中避免高速离心。

【常见问题】

问题1 目标条带较弱/没有

可能原因：样品降解，需添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融；抗体浓度太低，需增加抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；抗体亲合力太低，选用适合于IP/co-IP的相应抗体。

问题2 背景太高

可能原因：在无血清培养液中裂解细胞；在免疫沉淀前增加微珠预洗、免疫沉淀后增加漂洗次数和严谨度（高盐或去垢剂，如在第二次洗涤的步骤中增加NaCl浓度到500 mM）；改用高严谨度裂解液；使用洁净的仪器或液体；不要接触WB的膜转移面。

问题3 杂带较多

可能原因：磁珠的非特异性结合，或者样本上样量过高、或者抗体浓度过高。建议实验前对微珠增加漂洗，实验过程中增加洗涤次数，使用合适的样品和抗体浓度。

本产品仅供科研使用。