磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit
  • 磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit

磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit

( 别名:磁珠法 IP/Co-IP试剂盒(Basic基本版) IP/COIP Magnetic Beads kit; )
货      号 SB-AG002
英  文 名 Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit
规      格 100T
品      牌 圣尔生物share-bio
 一键复制产品信息
产品编号 名称 包装 品牌 目录价 促销价 货期 数量 购物车
SB-AG002 磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit 100T 圣尔生物share-bio ¥1585.00
SB-AG002 磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit 25T 圣尔生物share-bio ¥597.00

磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit 介绍

产品详情

试剂盒组成

缓冲液名称

25 T

100 T

储存温度

Protein A/G 磁珠

(圣尔#SB-PR001

1 mL

3×1 mL

4°C

IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer

(圣尔#SB-IP011

200 mL

600 mL

4°C

IP&co-IP酸性蛋白洗脱缓冲液

(圣尔#SB-IP012

3 mL

3×3 mL

4°C

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)

(圣尔#SB-PR037

1 mL

2 mL

 

-20°C

产品概述

本试剂盒能够高效完成抗原的免疫沉淀(IP)及免疫共沉淀(Co-IP)实验。本试剂盒的Protein A/G IP磁珠是在纳米级磁颗粒表面共价结合了大量的Protein A/G蛋白,与普通琼脂糖胶珠相比结合能力相同,背景更低。本琼脂糖磁珠可磁性分离,每次IP流程可省时近40%

微珠属性

适用范围  Co-IPIP

磁珠浓度  10 mg/mL

磁珠直径  2 μm

IgG结合量  0.5 mg/mL

适用抗体种属  广谱抗体种属

耐受高温  不耐高温

配基  蛋白A/G

试剂准备

缓冲液名称

成分

推荐使用圣尔产品

RIPA buffer

10 mM Tris-HCl pH7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA; 0.1% SDS; 1% Triton X-100; 1% Deoxycholate

细胞/组织裂解液RIPA(强)

(圣尔#SB-BR040

中和缓冲液

1 M Tris pH 10.4

IP&co-IP中和缓冲液

(圣尔#SB-IP013

蛋白酶抑制剂

1 M PMSF

复合型蛋白酶抑制剂(100×)

(圣尔#SB-WB016

磁力架

适配1.5/2 mL EP

16孔磁力架(1.5/2 mL EP tube
(圣尔#SB-IP004

注意:使用前在IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer(圣尔#SB-IP011添加适量的蛋白酶抑制剂

【使用说明】

1. 抗原样品制备(样本类型包括血清、悬浮细胞、贴壁细胞、大肠杆菌):

血清样本: 若目标蛋白丰度较高,建议用IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL,置于冰上备用。

悬浮细胞样本: 离心收集细胞(4°C500×g10 min),弃上清后称重,按每毫克细胞50 μL的比例用1×PBS洗涤2次;按每毫克细胞5-10 μL的比例加入IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer,同时加入蛋白酶抑制剂,混匀后置于冰上处理10min;离心收集上清液(4°C, 1,4000×g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20°C长期保存)

贴壁细胞样本 移去培养基,按每1.0×105个细胞150 μL 的比例用1×PBS洗涤两次;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5 mL EP管内,按每1×105个细胞20-30 μL的比例加入IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer,同时加入蛋白酶抑制剂,混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4°C1,4000×g10 min), 置于冰上备用(或置于-80°C长期保存)

大肠杆菌样本: 离心收集大肠杆菌(4°C1,2000×g,2 min),弃上清后称重,按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5-10 mL的比例加入IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer,同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mMPMSF),重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4°C1,7000×g,10 min)

2. 磁珠预平衡:

将磁珠充分混悬,取25-50 μL磁珠每反应,1 mL IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer洗涤3次,弃上清,每反应用100 μL IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer重悬磁珠。

3.抗体、抗原与磁珠结合

3.1 反应配置:

按照每反应1 mL细胞裂解液,25 μL磁珠(重悬于100 μL IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer),1-2 μg抗体,混合配置于1.5 mL EP管中。根据需要设置一组对照抗体反应管。

反应顺序三种建议:第一种抗体先与蛋白结合,再加入磁珠;第二种抗体先与磁珠孵育,最后加入蛋白;第三种同时加入。第一种与第二种相差不大,如果蛋白量过高(>1000 μg)建议使用第二种,否则蛋白容易吸附在磁珠上,降低得率。

3.2 抗体抗原结合:

置于翻转混合仪4°C翻转孵育过夜(8-24 h

3.3 洗涤:

弃去上清,用1 mL IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer翻转洗涤磁珠,每次5 min

4 洗脱蛋白:根据后续检测方案选择不同的洗脱方法

4.1 变性洗脱法(此方法洗脱的样品适用于PAGEWB检测)

彻底吸去剩余的上清液,加入30-50 μL2×SDS-PAGE loading buffer重悬沉淀物,稍微涡旋以混匀,随后稍稍微量离心让样品沉淀。将样品加热95°C10分钟。分离微珠,将上清液转移到新管。上清液为样品,用于后续SDS-PAGEWB分析。

4.2 非变性洗脱法(此方法保持原有的生物活性,可用于功能分析、质谱分析,也适于抗体纯化)

分离微珠,弃上清,向磁珠中加入50 μL蛋白洗脱缓冲液(酸性),在室温或低温不停吹打或震荡30-60秒。室温洗脱比4°C效率更高,建议酸性洗脱缓冲液在室温下预温。分离微珠,收集上清至新管,并立即加入5 μL的中和缓冲液,使洗脱产物pH调节至中性,样品用于后续分析。

注意事项

1 严禁冻结。

2 密闭保存,避免干燥,保持微珠浸于储液。

3 本品为悬液,使用前需充分混匀,微珠彻底悬浮后吸取,使用过程中避免高速离心。

4 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作,并应始终放置在4℃或冰浴,以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解,强烈建议在蛋白样品IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer添加适量的蛋白酶抑制剂。细胞裂解物可置于-80°C下长期保存。

5 裂解核蛋白,可在PIPA(强)裂解液中加入1mg/mL DNaseI2.5 mM MgCl2、蛋白酶抑制剂和1 mM PMSF

6 在结合反应过程中,微珠可能会出现聚团或呈片状,属于正常现象。

7 当目标蛋白分子量大小为50 kD或者25 kD时,建议更换轻链抗体/重链抗体,或使用纳米抗体磁珠,以尽量减少变性重链或轻链对SDS-PAGEWB结果产生的干扰。

8 质控取样点1:样本充分裂解后,取数十微升样本,记作Input,即为反应前样本;质控取样点2:样本免疫沉淀孵育结束后,取上清样本10-50 μL,记作supernatant,即为上清样本。

9 缓冲液最大兼容性:1mM DTT(二硫苏糖醇);3 M 脈盐•HCI8 M 尿素;2 M NaCl2% NP-401% SDS1% Triton X-100

常见问题

问题1 目标条带较弱/没有

可能原因:样品降解,需添加蛋白酶抑制剂,所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融;抗体浓度太低,需增加抗体浓度,必要时设立浓度梯度,摸索最佳浓度;抗体亲合力太低,选用适合于IP/co-IP的相应抗体。

问题2 背景太高

可能原因:在无血清培养液中裂解细胞;在免疫沉淀前增加微珠预洗、免疫沉淀后增加漂洗次数和严谨度(高盐或去垢剂,如在第二次洗涤的步骤中增加NaCl浓度到500 mM);改用高严谨度裂解液;使用洁净的仪器或液体;不要接触WB的膜转移面。

问题3 杂带较多

可能原因:磁珠的非特异性结合,或者样本上样量过高、或者抗体浓度过高建议实验前对微珠增加漂洗,实验过程中增加洗涤次数,使用合适的样品和抗体浓度

本产品仅供科研使用。

储存条件及期限 存放于4°C,微珠禁止冻结,有效期12个月;冰袋运输
搜索质检报告(COA)
搜索MSDS
暂无技术资料

磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit 说明书

For research use only. Not intended for human and animal therapeutic or diagnostic use.

线上下单立享积分,加入圣尔会员,礼品随心兑!点击注册

磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit 相关产品

磁珠法IP/Co-IP试剂盒(基本版)Protein A/G IP/Co-IP Basic Kit

IP/Co-IP免疫沉淀试剂盒(蛋白A/G磁珠法)Protein A/G Magnetic Beads Kit

磁珠法IP/Co-IP试剂盒(标准版)Protein A/G IP/Co-IP Standard Kit

最优采购方案
   © 2005-2025 上海圣尔生物科技有限公司 版权所有,保留所有权利。 沪ICP备15051362号   

全力打造生命科学领域试剂与耗材的国产精品超市