免疫荧光简介

免疫荧光（Immunofluorescence, IF）是一种利用抗原-抗体特异性反应原理，结合荧光标记技术，对组织或细胞中的特定抗原进行定位、定性和相对定量的实验技术。该技术具有高度的特异性、敏感性和直观性，广泛应用于生命科学研究和临床诊断。

免疫荧光技术主要分为直接法和间接法两种：

• 直接法：将荧光素直接标记在特异性一抗上，直接与抗原结合。操作简单，非特异性反应少，但灵敏度较低。
• 间接法：先用未标记的一抗与抗原结合，再用荧光素标记的二抗与一抗结合。灵敏度高，一种标记二抗可用于多种一抗，但可能产生非特异性反应。

实验步骤

以下为间接免疫荧光法的主要实验流程：

细胞样本制备

      1. 将细胞接种在盖玻片或培养皿中，待细胞密度达到60%-80%时进行实验，用预温的PBS轻轻漂洗细胞2-3次，去除培养基

      2. 加入足量4%多聚甲醛溶液，室温固定15-20分钟，PBS洗涤3次，每次5分钟，彻底去除固定剂

组织样本制备

  石蜡切片

      1. 获取新鲜组织样本，尽快处理，用4%多聚甲醛固定组织（固定时间根据组织大小而定，通常6-24小时），随后进行组织脱水、透明、浸蜡、包埋

      2. 石蜡切片需脱蜡至水：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟→100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5分钟→95%乙醇5分钟→80%乙醇5分钟→70%乙醇5分钟→蒸馏水洗

      3. 进行抗原修复（根据抗体要求选择适当修复方法），PBS洗涤3次，每次5分钟

  冰冻切片

      1. 获取新鲜组织样本，尽快处理，用4%多聚甲醛固定组织（固定时间根据组织大小而定，通常4-12小时)，组织在20%-30%蔗糖溶液中沉底（4℃过夜）

      2. OCT包埋：将组织块放在托架上，加适量OCT包埋剂，确保完全覆盖组织；快速在液氮或干冰中冷冻（-20℃至-80℃），切片机中切片（厚度通常为5-10μm）

      3. 切片贴附于载玻片上，-20℃保存或立即进行后续实验

TSA多色免疫荧光技术

简介

酪酰胺信号放大（TSA）技术，是一种高灵敏度的信号放大技术。该技术利用辣根过氧化物酶（HRP）催化标记酪胺的荧光底物，在抗原-抗体结合部位产生大量荧光沉积，从而实现信号的高效放大。

较传统技术（一抗直标、二抗间接标记和链霉亲和素-生物素等）有信号放大倍数高、操作简单、可检测低丰度抗原、多重标记不受限制且成本低等优势。

TSA产品特点

TSA产品推荐

TSA实验图

TSA&绿色荧光二抗（Hela细胞）

结果显示：用常规免疫方法检测到信号很弱，用TSA可得到很明亮的信号（信号放大作用）

Tyramide石蜡切片染色

结果显示：Tyramide染色石蜡切片效果良好，且无非特异性染色，染色背景干净。

Tyramide细胞染色（Hela细胞）

结果显示：Biotin/488/594-Tyramide染色细胞效果良好，且无非特异性染色。

Tyramide多色染色

结果显示：Tyramide系列产品细胞和组织多色染色效果良好。