快速内切酶HindIII-HF
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快速内切酶HindIII-HF

货      号 SB-EGR439S
规      格 500 rxns
品      牌 圣尔生物share-bio
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SB-EGR439S 快速内切酶HindIII-HF 500 rxns 圣尔生物share-bio ¥192.00

快速内切酶HindIII-HF 介绍

产品详情

快速内切酶HindIII

产品介绍

圣尔快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒DNAPCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有快速内切酶在圣尔通用酶切BufferColor Buffer中都具有优良的活性,能够在5-15分钟内完成酶切。此外,圣尔生物去磷酸化、连接试剂在圣尔通用酶切Buffer中均具有100%活性,支持一管化反应,提升酶切-修饰-连接的体验。

Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

识别序列

A/AGCTT

酶切位点

5'...A A G C T T...3'

3'...T T C G A A...5'

【保护碱基】

3

反应温度

37°C

随酶Buffer

10×圣尔通用酶切Buffer10×圣尔Color Buffer

【失活条件】

80°C, 20 min

甲基化敏感性

Dam: no effect.Dcm: no effect.CpG: no effect.EcoKI: no effect.EcoBI: some blocked.

使用方法

1 DNA快速酶切流程

1.1 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

 

质粒DNA

PCR产物

基因组DNA

ddH2O

15 μL

16 μL

30 μL

10×圣尔通用酶切Buffer(或10×圣尔Color Buffer

2 μL

3 μL

5 μL

底物DNA

2 μL1 μg

10 μL0.2 μg

10 μL5 μg

快速内切酶

1 μL

1 μL

5 μL

总体积

20 μL

30 μL

50 μL

注:本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×圣尔通用酶切Buffer(或10×圣尔Color Buffer)加入量可适当减少至2μl。但由于PCR体系中,DNA聚合酶很可能同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。

1.2 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

1.3 37°C温育15 min(质粒),或15-30 minPCR产物),或30-60 min(基因组DNA);

1.4 80℃温育20 min即可使酶失活,停止反应(可选);

1.5 如果使用圣尔Color Buffer进行酶切反应,得到的产物可以直接进行上样电泳。

2 双酶切或多酶切

2.1 每种快速内切酶的用量为1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;

2.2 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10

2.3 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

3 适用于质粒的扩大反应体系

总体积

20 μL

20 μL

30 μL

40 μL

50 μL

DNA

1 μg

2 μg

3 μg

4 μg

5 μg

快速内切酶

1 μL

2 μL

3 μL

4 μL

5 μL

10×圣尔通用酶切Buffer(或10×圣尔Color Buffer

2 μL

2 μL

3 μL

4 μL

5 μL

注:如果总反应体系大于20 μL,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

【缓冲液兼容性

 

圣尔通用酶切Buffer

FastDigest Buffer

(Thermo Scientific)

rCutSmart™ Buffer

(NEB)

QuickCut™ Buffer

(Takara)

活性

100%

75%

100%

100%

 

储存条件 -20℃储存,4度蓝冰运输
搜索质检报告(COA)
搜索MSDS
暂无技术资料

快速内切酶HindIII-HF 说明书

For research use only. Not intended for human and animal therapeutic or diagnostic use.

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