探索高灵敏度Western Blot检测的核心技术
ECL发光液简介
ECL（Enhanced Chemiluminescence）化学发光液是Western Blot检测中的核心试剂，通过辣根过氧化物酶（HRP）催化化学发光反应，实现对目标蛋白的高灵敏度检测。
技术优势： ECL技术具有灵敏度高（可达fg级）、线性范围宽、操作简便等优势，已成为蛋白质免疫印迹的金标准检测方法。
圣尔生物提供全系列ECL发光液产品，涵盖从基础型到卓越型的多种灵敏度选择，满足不同实验需求：
- 基本型 - 适用于常规蛋白检测（pg级）
- 通用型 - 平衡灵敏度与成本（pg级）
- 卓越型 - 超高灵敏度（fg级）检测
- 飞敏型 - 快速反应型，适合高通量筛选
ECL发光液工作原理
ECL化学发光基于HRP催化鲁米诺（Luminol）的氧化反应，通过增强剂大幅提升发光信号强度和持续时间：
HRP催化H₂O₂分解，生成活性氧中间体
活性氧氧化鲁米诺生成激发态中间体
激发态衰变释放425nm蓝光光子
增强剂提升发光强度100-1000倍
信号增强机制：
圣尔生物ECL产品中添加的专有增强剂能够：
- 加速HRP的催化循环，提高酶周转率
- 通过电子传递使鲁米诺氧化更高效
- 延长发光信号至30-60分钟，便于弱信号捕获
- 显著降低背景噪音，提高信噪比
ECL发光液产品特点
超高灵敏度
卓越型产品可检测fg级蛋白，比传统ECL灵敏度提高100倍
持久发光
信号持续时间长，提供充足时间优化曝光条件
即用便捷
A/B液1:1混合即可使用，无需复杂配制过程
批次稳定
严格质控确保批次间一致性，4℃保存有效期长达1年
ECL发光液选择指南
根据不同实验需求选择合适的ECL产品：
| 产品名称 | 弱爆了ECL发光液 | Basic基本型ECL发光液 | lumiQ通用型ECL发光液 | 飞敏™型ECL发光液 | lumiBest卓越型ECL发光液 |
|---|---|---|---|---|---|
| 货号 | SB-WB110 | SB-WB001 | SB-WB012 | SB-WB004 | SB-WB011 |
| 灵敏度 | 中低灵敏度 | 中低灵敏度 | 中度灵敏度 | 中高灵敏度 | 最高灵敏度 |
| 低至10pg级 | 中pg级 | 低于pg级 | 低pg级到高fg级 | 低fg级 | |
| 信号持续时间 | 24小时 | 长达24小时 | 12小时 | 8小时 | 6小时 |
| 适用检测系统 | 均适用X-ray感光胶片或发光检测仪器 | ||||
| 一抗稀释比 1mg/mL |
1：1000 | 1：1000 | 1：1000 | 1：5000 | 1：5000 |
| 二抗稀释比 | 1：20,000~100,000 | 1：20,000~100,000 | 1：20,000~100,000 | 1：100,000~500,000 | 1：100,000~250,000 |
| 适用场景 | 高丰度蛋白检测 | 过表达蛋白及内参检测时使用。 | 能检测低丰度目标蛋白 | 日常使用，稳定性好，兼容性好 | 靶点丰度极低，样品及其珍贵，节省抗体使用 |
ECL发光液性能展示
以下为deepbio进行的ECL发光液测评：
主要利用相同蛋白量的293T细胞裂解液进行Western实验，通过ECL检测actin蛋白水平；
从两个方面比较ECL发光液的灵敏度：
1. 显影信号强度比较： 相同蛋白量，相同曝光时长，观察各品牌显影效果，信号强者为优。实验检测曝光时长：0.3s，0.5s，1s，3s，5s，10s，20s，30s，40s，50s，60s，70s，80s，90s，100s。
2. 显影灵敏度比较：系列蛋白量梯度，系列曝光时长，检测各品牌的蛋白浓度检测下限。实验浓度：500ng/孔，250ng/孔，100ng/孔，50ng/孔，10ng/孔。
显影效果方面：
灵敏度：不同品牌ECL发光液显影效果差距明显。超低量（10ng总蛋白）检测中，圣尔发光液表现最为优秀。
曝光时间：相同蛋白量下，圣尔所需曝光时间最短。
用户反馈
常见问题解答
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 信号弱或无信号 | 靶蛋白含量过低、转膜不完全、二抗失效 | 选用更高灵敏度ECL（如SB-WB011）；延长转膜时间；更换二抗 |
| 背景过深 | 封闭不充分、一抗浓度过高、过度曝光 | 延长封闭时间至1小时；优化一抗浓度；减少曝光时间 |
| 发光时间短 | 二抗浓度过高、底物混合后放置过久 | 降低二抗浓度；底物混合后立即使用 |
| 条带弥散 | 电泳条件不当、转膜缓冲液过热 | 优化电泳条件；转膜时使用冰浴降温 |
| 膜上出现斑点 | 膜未均匀浸润、底物混合不均 | 确保膜完全浸润在缓冲液中；充分混匀A/B液 |
| ECL保存问题 | 反复冻融、见光分解、过期 | 4℃避光保存；开封后一年内用完；避免污染 |
使用小贴士：
优化曝光： 对于弱信号，尝试多次短曝光（30s, 1min, 5min）而不是单次长曝光。
节约试剂： 使用保鲜膜覆盖膜表面而非浸没，可减少ECL使用量50%以上。
延长保存： 将A/B液分装成小份，避免反复冻融主包装，可延长保存时间。
