ELISA技术简介

ELISA（酶联免疫吸附试验，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种广泛应用于生物医学、临床诊断和科研领域的高灵敏度、高特异性免疫分析技术。

该技术利用抗原-抗体特异性结合的原理，结合酶催化底物显色的反应来检测样品中极微量的目标物质（如蛋白质、激素、抗体、病原体抗原等）。

其核心优势在于：

  • 灵敏度高：可检测ng甚至pg级别的微量物质
  • 特异性强：基于抗原抗体特异性结合，交叉反应率低
  • 操作简便：流程标准化，易于掌握
  • 可批量检测：适合同时处理多个样本
  • 成本相对较低：相比其他检测技术更经济实用
 

ELISA试剂盒检测原理

ELISA试剂盒的核心原理是基于抗原-抗体的特异性结合与酶催化信号放大的结合，通过将不可见的免疫反应转化为可定量的显色信号，实现对目标物质的检测。

基本共性原理：

1. 特异性结合：抗原与抗体的"锁钥式"特异性识别与结合
2. 酶标记放大：通过酶（如HRP、ALP）标记抗体或抗原，将免疫反应转化为可检测信号
3. 信号关联：显色强度与目标物质含量相关，通过酶标仪检测实现定量分析

 

ELISA试剂盒核心组成

标准ELISA试剂盒包含以下核心组件，共同实现目标物的精确检测：

组分 作用 常见示例
预包被板 微孔板表面固定捕获抗体/抗原，提供固相支持 96孔或384孔聚苯乙烯板
标准品 浓度已知的待测物，用于绘制标准曲线 重组蛋白冻干粉或预稀释液
检测抗体
（检测溶液A、检测溶液B）		 酶标记的抗体（直接法/夹心法）或二抗（间接法） HRP/AP标记抗体
显色底物 酶催化后产生颜色/荧光/化学发光的化合物 TMB（显蓝）、OPD（显橙）、化学发光底物
终止液 终止酶反应，稳定显色信号 硫酸（HRP体系）、氢氧化钠（AP体系）
洗涤缓冲液 去除未结合物质，降低背景 PBS/Tween-20溶液
封闭液/样品稀释液 减少非特异性结合，稀释样本 含BSA或胎牛血清的缓冲液
 

ELISA试剂盒类型

根据检测原理和目标物特性，ELISA试剂盒主要分为以下类型：

类型 检测对象 特点 优势
局限性		 应用示例
夹心法 大分子抗原（>10 kDa） 捕获抗体包被→捕获抗原→酶标检测抗体结合，形成“三明治”结构 高灵敏度于特异性，适合复杂样本；
需配对抗体（表位不重叠），抗原需多价		 大分子抗原（如细胞因子、病毒蛋白）检测
间接法 血清中的抗体 通过已知抗原捕获样本中的目标抗体，再用酶标二抗检测，适用于病原体抗体检测。 灵敏度高（信号放大），经济灵活（通用二抗）；
可能因二抗引起交叉反应，背景较高		 病原体抗体、自身抗体检测
竞争法 小分子半抗原（<1 kDa） 样品抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体，信号与样品抗原浓度成反比

适合小分子，抗基质干扰强，无需纯化样本；

操作复杂，信号反向解读，灵敏度较低

 激素、药物、毒素检测
直接法 小分子抗原 抗原直接包被于固相载体，酶标一抗直接结合抗原并显色 步骤少、速度快、无二抗交叉反应；
灵敏度低、需特异性一抗、背景较高		 小分子抗原检测、免疫反应分析

 

    高品质ELISA试剂盒（飞敏）：SB-QY8374、SB-QY8709、SB-QY8445、SB-QY8588、SB-QY8400、SB-QY8748等

    普通ELISA试剂盒

              常规ELISA试剂盒：SB-EH0001、SB-EH0002、SB-EH0003、SB-EH0004、SB-EH0005、SB-EH0010等

              快捷型ELISA试剂盒：SB-EH0265、SB-EH0089、SB-EM3896、SB-EM5466、SB-EK8016、SB-ET7059等

              宽范围ELISA试剂盒：SB-EC6310、SB-EC5622、SB-EH0287、SB-EM3906、SB-EH1456、SB-EH0288等

              小样本ELISA试剂盒：SB-EH0166、SB-EC6761、SB-EC6845、SB-EM5360、SB-EC6775、SB-EC6776等

              高敏型ELISA试剂盒：SB-EH3231、SB-EK7603、SB-EH0165、SB-EK7602、SB-EC5561、SB-EM5526等

 

ELISA试剂盒应用场景

ELISA试剂盒凭借其标准化、高通量、高灵敏度的特性，已成为多个领域的核心检测工具。

临床诊断与疾病监测
  • 传染病诊断：HIV、乙肝、新冠抗体检测
  • 肿瘤标志物追踪：PSA、AFP、CA-125
  • 内分泌疾病：胰岛素、TSH、皮质醇检测
  • 自身免疫病：类风湿因子、抗核抗体检测
生物医学研究
  • 细胞因子与炎症因子定量
  • 信号通路与蛋白质互作研究
  • 疫苗与抗体开发评估
  • 磷酸化蛋白动态监测
药物研发与质控
  • 药代动力学(PK)研究
  • 免疫原性评估(ADA)
  • 宿主蛋白残留(HCP)检测
  • 疫苗抗原定量
食品安全与环境监测
  • 食品过敏原检测（花生、麸质）
  • 毒素筛查（黄曲霉毒素、瘦肉精）
  • 农药残留检测（草甘膦、有机磷）
  • 饮用水致病菌检测
 

ELISA试剂盒选择指南

选择适合的ELISA试剂盒是实验成功的关键，需综合考虑检测目标特性、样本类型、精度需求和预算等因素。

1
明确检测目标
  • 大分子抗原（>10 kDa）：选择夹心法试剂盒（灵敏度最高）
  • 血清抗体：选择间接法或双抗原夹心法
  • 小分子半抗原（<1 kDa）：选择竞争法试剂盒
  • 磷酸化蛋白：选择专用试剂盒（含磷酸酶抑制剂）
2
分析样本特性
  • 血清/血浆：选择含抗基质干扰成分的试剂盒
  • 细胞上清：确认兼容培养液成分（如FBS）
  • 组织裂解液：避免含SDS的裂解液（破坏抗体结合）
  • 微量样本（<50 μL）：选择高敏试剂盒（如化学发光型）
3
评估关键性能参数
  • 灵敏度：目标物正常浓度的1/10以下
  • 动态范围：覆盖样本预期浓度±50%
  • 特异性：验证交叉反应数据（尤其同源蛋白）
  • 精密度：CV值<10%（板内/板间重复性）
  • 种属兼容性：确认适用种属（人/小鼠/大鼠）
4
匹配实验条件
  • 设备匹配：无化学发光仪 → 选酶显色法
  • 时间限制：快速检测 → 选1.5小时快检试剂盒
  • 预算考量：科研预实验可用经济型，正式实验选高端品牌
 

常见问题解答

如何判断ELISA试剂盒的灵敏度是否足够？
灵敏度通常以最低检出限（LOD）表示，应低于目标物正常浓度的1/10。例如，检测人血清IL-6（正常值1-5 pg/mL），应选择LOD≤0.5 pg/mL的试剂盒。高敏研究（如神经因子）需选择化学发光试剂盒（fg/mL级）。
为什么我的标准曲线线性不佳？
可能原因：1) 标准品溶解不充分 - 冻干粉需充分涡旋+短暂超声；2) 稀释误差 - 梯度稀释时更换枪头；3) 酶标抗体失活 - 检查保存条件（-20℃避光）；4) 温育时间不一致 - 使用定时器精确控制各步骤时间。
如何解决ELISA实验中的高背景问题？
解决方案：1) 优化封闭 - 延长封闭时间（2h→过夜）或更换封闭剂（5%脱脂奶粉）；2) 加强洗涤 - 增加洗涤次数（≥5次），确保每孔注满洗液；3) 样本稀释 - 复杂样本（如血清）适当稀释减少基质效应；4) 检查抗体特异性 - 非特异结合需更换抗体对。
检测小分子应该选择哪种类型的ELISA？
小分子（<1 kDa，如激素、药物、毒素）应选择竞争法ELISA。因为小分子通常只有一个表位，无法同时结合两个抗体（夹心法要求）。竞争法通过样本抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体，信号与样本浓度负相关。
化学发光ELISA与传统显色ELISA有何区别？
主要区别：1) 信号检测 - 化学发光检测光子信号（RLU），传统显色检测吸光度（OD值）；2) 灵敏度 - 化学发光高10-100倍，可达fg/mL级；3) 设备 - 需化学发光酶标仪；4) 动态范围 - 化学发光更宽（4-5个数量级）；5) 成本 - 化学发光试剂盒更贵，但适合超微量检测。